通过辨别细胞生长状态避免细胞死亡的方法技巧

原标题：别让细胞轻易 Go Die，几招辨别细胞生长状态

实验汪在养细胞的时候，往往全部注意力都在细胞身上，全心全意地伺候着细胞主子，生怕一不小心就遭遇污染。

虽然要小心污染是没错，但要养好细胞，主子们的生长环境也应时刻放在心上！

为了能更好地模拟体内环境以保证细胞的增殖和分化，细胞生物学实验对培养条件有着严格的要求。时刻了解细胞的生长环境以判断其生长状态，对于细胞培养相当重要。

那么该怎样判断细胞状态呢？“揣度圣意”可不能靠促膝谈心，而是要依靠镜检。

     观察你的细胞     

在进行任何操作的时候，都要在显微镜下检查细胞状态。

细胞持续在显微镜的监控之下，才不会随便捣乱。镜检不仅能看出细胞是否被污染，还能观察到细胞的状态，看看是不是朝着健康的方向发展。

今天小编 就以上面这张镜检结果图为例，来跟大家聊聊细胞培养中的一些常见状态。

A 细胞贴壁不均匀

真核细胞这些小家伙们同样喜欢抱团。在圆形培养皿或多孔板中培养时，细胞在接种后有集中在培养皿或多孔板中间的趋势，不易均匀分散在培养器皿内。

像上图右上角 A 圈中的细胞分布就明显地比左下方来得致密。这将会导致最后实验检测结果不均一，实验可重复性差。

通常来说，发生这种情况的原因有以下几点：
● 接种时细胞没完全分开，有聚集；
● 培养表面不平坦；
● 接种密度不够；

出现这样的情况，可以采取下列措施：
● 将细胞充分打散；
● 接种时多点接种；
● 做密度梯度找合适接种密度；
● 购买高质量的细胞耗材；

使用小孔径的多孔板就一定要更加重视这个操作了，因为小孔径的多孔板中培养液的流动一般不足以将细胞均匀地分散开来。

B 细胞颗粒或空泡

B 圈中出现的现象可以判断为形成了细胞颗粒或产生了空泡。我们可以放大仔细观察一下：

如果出现细胞颗粒，尤其是核周围的颗粒增加，或者细胞质内出现空气泡，都暗示着细胞的状态不太好，细胞的收获率就会不如预期。

一般来说，出现这样的状态可以通过更换培养液来解决。但如果更换培养液也无济于事的时候，就需要考虑是否存在微生物污染、细胞系衰老、培养基或血清不足等问题了。

C 气泡干扰细胞贴壁

血清中含有大量蛋白，所以在用移液器进行移液操作时很容易产生气泡。气泡会干扰细胞贴壁，导致细胞无法正常生长。

下图中的大圈圈就是恼人的气泡了。

产生气泡多数是由于加液的方式不对，从培养皿中间加液、加液或吹打时速度太快都会形成气泡。

正确的加液姿势应该是靠培养孔壁添加培养基，加液或吹打动作要缓慢。

D 细胞凋亡

细胞凋亡也是细胞培养过程中的一个明显信号。细胞死亡时会变成圆形，并从培养皿表面脱落悬浮在培养液中。

这个画面，对于养啥死啥星人应该很眼熟吧。

如果在培养过程中持续地观察到细胞凋亡或坏死，就说明细胞培养的状态很不好。

如果细胞接连凋亡，就要用冻存备份的细胞替换现有的细胞系。在细胞复苏的融化过程中，总有些扛不住压力而死亡的细胞。因此需要在复苏细胞接种一天后应进行一次换液以避免死细胞和毒性物质在培养液中的累积。

E 细胞进行有丝分裂

细胞进行有丝分裂证明辛苦付出终于有了回报，你手头的细胞主子们开始培育下一代了！

在细胞增殖的过程中，细胞会呈圆形并部分地从培养皿表面脱离，直到分裂成两个子细胞后再次贴壁，并恢复其形态学特征。

给你的细胞们一点空间，他们会更乐意培养下一代。在细胞铺满 70-80% 的培养皿表面时进行传代效果会比较好，当细胞培养密度过高时细胞会停止增殖。

见识过了上述种种状态，
是不是对细胞的培养条件有一些新的认识呢？

只要在镜检之下进行操作，细胞的各种小动作都逃不过实验汪的法眼，只要理解了每个状态出现的原因，仔细分析，就可以找到应对策略。

来源：“Eppendorf实验室 ”公众号，作者： 艾本德
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